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支原體污染的多重治理方案

更新時間:2020-11-06  |  點擊率:983

在疫苗生產、生物制藥和細胞培養試驗中,支原體污染的預防和祛除,是保證生產質量和實驗順利的重要環節。

 

在全qiu支原體檢測和祛除領域中,近二十年一直排名*的,是一家位于德國柏林郊外的生物廠家——德國Minerva Biolabs公司(簡稱德國MB)。

全qiu眾多的大型生物藥廠以及數不過來的生物實驗室,大部分預防、檢測,祛除支原體的產品,均都來自于這家MB公司。

 

在之前的文章中,我們已經為大家介紹了MB家族全套的支原體檢測產品系列』,其中包括熒光定量PCR方法的檢測試劑盒,以及可做方法學驗證的標準品等。

 

而本期文章,我們將把MB品牌的支原體祛除和預防系列』產品,簡明扼要地介紹給大家,希望對疫苗生產、生物制藥、細胞治療、CAR-T等項目的質檢質控,以及更多實驗室的科研工作者,能有所幫助。

 

本文共分三個部分:

 

一,細胞培養時,可加入培養基中的支原體清除劑。

 

二,工作區域中支原體污染的清除系列,同時對細菌、病毒、真菌、霉菌都有效。

 

三,預防培養箱水槽、水浴鍋中水,不被支原體污染,同時對霉菌,孢子,細菌,真菌都有效的產品系列。

 

一,細胞中支原體的祛除

(一)Zell Shield®支原體祛除劑(培養基用)

1. 適用范圍

(1)細胞已發生支原體污染,但又不愿丟棄,希望繼續培養(如已轉染或大量擴增的細胞)。

(2)初始培養的原代細胞。

(3)存在支原體污染高風險的細胞。

2. 用法:

(1)1:100加入培養基。

(2)當細胞存在支原體污染時,應先對細胞懸浮沖洗三次,再Zell Shield®培養基培養。每次傳代前都應做懸浮沖洗處理。連續傳代4次,支原體即可祛除。

 

(二)Mynox® Gold支原體祛除劑(珍貴細胞保種用)

1. 適用范圍

被支原體污染的珍貴細胞或不易獲得的生物樣本(如細胞種子)。

2. 用法:

步驟1. 將「*治療液」加入到4.5ml培養基(FBS需≤5%)中,培養細胞(細胞數為104~105)。

步驟2. 細胞長至80%-90%匯合時,細胞傳代。將1管「鞏固防護液」加到9.5ml培養基中,用該培養基繼續培養。

步驟3. 重復步驟2,細胞再傳代2次,支原體即*祛除。

注意:每次傳代時,hao都能把細胞懸浮沖洗三次,可取得更好的治療效果。

 

(三)Mynox®支原體祛除劑(珍貴樣本用)

1. 適用范圍

被支原體污染的珍貴細胞、不易獲得的生物樣本或病毒收獲液(特別是不能長期培養的樣品)。

2. 用法:

(1)對于貼壁細胞:

步驟1. 培養皿中加入200μl Mynox®和 2.8ml培養基中(FBS≤5%),混勻。

步驟2. 再加入2ml細胞(細胞數為104~105,培養基中的FBS需≤5%)。

步驟3. 細胞培養2小時,棄上清,換用新鮮培養基培養4代即可。

(2)對于懸浮細胞:

步驟1. 在離心管中加入200μl Mynox®和1.6ml胰酶(0.125 %5 mM EDTA in PBS),混勻。

步驟2. 加入1.6ml細胞(細胞數為104~105)。

步驟3. 室溫靜置30min。

步驟4. 600×g離心5min。棄上清,換用新鮮培養基培養4代即可。

 

 

二,工作區域中支原體的祛除

(一)MB支原體祛除噴霧

英文名: Mycoplasma-OffTM

1. 用途:實驗環境(如實驗臺、超凈臺、培養箱、儀器設備)、無菌車間和潔凈生產線的支原體的祛除,對清除支原體、細菌、真菌(含真菌孢子)和多種病毒污染均有效。

 

2. 用法:噴霧劑噴灑待消毒的表面,等待5-10min后,用干凈紙巾擦拭。通風2-3分鐘

 

(二)MB支原體祛除濕巾

英文名:Mycoplasma-OffTM Wipes

1. 用途:應用于電子設備、門把手、電話、移液器表面的支原體的祛除,對支原體、細菌、真菌(含真菌孢子)和多種病毒均有效。

 

2. 用法:用濕巾擦拭后,應讓被消毒物體的表面保持濕潤,再讓其自然風干。

 

三,培養箱水槽、水浴鍋中支原體的預防

支原體祛除劑(水槽用)

英文名:Water ShieldTM

1. 用途:預防培養箱水槽、水浴鍋的支原體、細菌和真菌污染。

 

2. 用法:

步驟1. 本品按1:200比例加入到蒸餾水中,如1L蒸餾水+5ml Water ShieldTM

步驟2. 加入Water ShieldTM的蒸餾水可直接加入培養箱水槽或水浴鍋中

步驟3. 4周左右清洗水槽,換水,重新加入Water ShieldTM

 

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