發表在Science Advances上的一項新研究中,來自瑞典林雪平大學的研究團隊表明,一種令人費解的細菌中常見DNA修飾在人類或其他哺乳動物中并不存在。該研究表明,動物中表觀遺傳標記6mdA的檢測可能是所用技術的局限性和樣品的細菌污染造成的。
幾年前,一些相關研究的發表,引起了遺傳學研究者的興趣。這些研究檢查了一個特殊的表觀遺傳標記,即影響DNA序列在不同細胞中使用方式的DNA修飾。這個標記以前從未在多細胞生物中觀察到。相比之下,這種被稱為“6mdA”的標記在細菌中較為常見,它在保護細菌免受病毒侵害方面發揮著重要作用。
許多研究團隊的報告稱,他們在多種動物物種甚至人類細胞中發現了6mdA,這不僅引起了研究界的興趣,也引發了一些問題。其中一個與檢測到的6mdA水平有關,這個水平非常低,以至于科學家們懷疑這樣一個罕見的表觀遺傳信號是否真的有作用。
在這些初步報告之后,一些其他已發表的研究無法在動物中檢測到6mdA。正如許多其他研究團隊一樣,林雪平大學生物醫學和臨床科學系研究員Colm Nestor博士團隊也開始研究這種令人費解的表觀遺傳信號。然而,他們無法在人體或小鼠細胞中檢測到。終,他們在兩個人體細胞樣本中檢測到了6mdA,但結果發現兩個樣本都被支原體細菌污染。
研究人員懷疑表觀遺傳標記來自細菌而不是人體細胞。他們用抗支原體的抗生素治療細胞后,發現6mdA信號消失。
研究人員認為,支原體污染是表觀遺傳學研究中被低估的問題。他們發現的支原體菌株在健康人群中很常見,通常不會對健康造成任何負面影響。由于支原體細菌不僅可以存在于細胞外,也可以存在于人體細胞內,因此該細菌可能存在于人類樣品中,但未被檢測到。對于大多數類型的細菌,研究人員可以很容易地檢測出實驗室培養的細胞是否受到污染。然而,支原體污染的情況并非如此,它需要特殊的檢測方法。
研究人員很快發現,不僅支原體細菌給研究6mdA標記的研究人員帶來了問題。他們還發現了檢測這種表觀遺傳修飾的幾種方法的問題。
研究通訊作者Nestor說:“我們意識到,這些技術檢測到的6mdA‘信號’只是噪音。然而,由于一些復雜的技術問題,其中一些方法中的背景噪聲不是隨機的,而是一個真實的信號。現在,我們可以毫無疑問地說,哺乳動物中不存在6mdA。”
Nestor認為,哺乳動物中6mdA的研究報告來自于在學術期刊上發表的執行良好的研究。這是非常不尋常的,作為*不同的人工制品,有幾種方法給出了類似的誤導性結果。
Nestor說“當我們分析非常罕見的現象時,我們必須要非常小心,并考慮我們是否真的可以用我們選擇的方法來測量它們。關于6mdA,如果研究人員停止研究一些根本不存在的東西,那就可以節省很多寶貴的時間和金錢,避免更多的失望。”
支原體污染對于細胞培養也是毀滅性的災害,那我們該如何檢測和祛除支原體呢?
qPCR法介紹:
熒光定量PCR法(qPCR):是在常規PCR基礎上,將『針對支原體特異性保守序列的探針』做熒光標記,使PCR擴增后的產物帶有熒光,利用熒光信號的變化和配套軟件,進行DNA擴增反應的實時監測,簡稱qPCR。
優點:①靈敏度高、特異性強。
②時間短,2-3小時出結果。
③檢測結果可定量。
④操作簡便。
缺點:①對于已做支原體滅活處理的樣品,由于支原體DNA仍舊存在其中,PCR結果會出現假陽性。(可用培養法做補充驗證)
②不同廠家生產的試劑盒質量差異巨大(由于引物及內在設計不同),需謹慎選擇,盡量在專業人員推薦指導下使用。