細胞培養被支原體污染是個世界性問題,在細胞培養中支原體感染發生率達到63%。支原體是一類無細胞壁,形態呈高度多形性,為圓形、絲狀或梨形,其直徑僅有0.13~0.18μm,變形能力大,故能通過濾菌器,突出的結構特征是沒有細胞壁,對作用于細胞壁生物合成的抗生素不敏感。研究表明,支原體能耗盡營養物,促進代謝積累,導致pH改變,對細胞造成多種影響,包括生長狀況、生化特性、代謝、免疫、以及細胞存活等多方面的改變,繼而干擾實驗結果,或造成無法解釋的差異。更加不幸的是拯救被感染的細胞幾乎是不可能的。
目前已知的主要污染源是動物血清、胰酶和已污染培養物的氣溶膠,例如,豬鼻支原體通過胰酶,在消化細胞時進入細胞培養物,并造成污染。在原代細胞與傳代細胞的檢測中,原代細胞與傳代細胞分離出支原體的頻率是有明顯差異的,傳代次數越多的細胞,污染支原體的可能性就越大,這也是多次與動物血清、胰酶和已污染培養物的氣溶膠接觸后造成的,在原代細胞中,污染率低于4%,而傳代細胞的污染率則高達57%~92%。
如何預防支原體的污染
通常來說,被污染的細胞應該丟棄,以避免成為污染源。但對于珍貴的細胞,以往別的品牌的支原體清除劑,其實只是抑制劑,它們抑制支原體的DNA合成和蛋白合成,但無法殺除。Mynox®是市面上一款具有殺滅作用的清除劑。它提取自枯草桿菌,可與支原體膜特異性結合,破壞膜通透性,導致支原體膨脹破裂而死。